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紫外可见分光光度计定量、定性分析需注意的问题
点击次数:744 发布时间:2017-07-31
使用紫外可见分光光度计进行定量和定性分析需注意以下一些问题: 
  吸光度读数范围:吸光度测量误差在透过率过大或过小时都会变大,为了满足定量分析的误差要求<5%),在定量分析时要求吸光度应在一定的范围内,这个范围的具体值与仪器性能有关,主要是与紫外可见分光光度计检测系统噪声大小有关,但通常都在0。1~1。0范围内,如果仪器的档次更低,则范围更窄。根据朗伯比尔定律,影响吸光度大小的因素主要是样品摩尔吸光系数,浓度和比色皿光程。实验中吸光度过大的样品可通过稀释样品使吸光度到所需范围内。如果样品不能稀释,可以改用光程较小的比色皿减小吸光度。吸光度过小的样品可使用光程较大的比色皿以增大吸光度。
  吸收波长的选择:进行单波长测量时,需要考虑朗伯比尔定律对入射光单色性的要求和测定灵敏度的要求。没有干扰时,一般选择在吸收峰的zui大吸收波长位置处,如果有干扰,选择在没有干扰且吸光度变化较平缓的位置。 进行多波长校正时,除尽量满足单波长测定的波长要求外,还要求多个组分间的吸收光谱间线性无关。 
  狭缝的选择:狭缝的大小会影响到仪器的信噪比和标准曲线的线性范围。狭缝过大,通常会使线性范围变小,特别是当不在zui大吸收波长位置测定时更是如此。狭缝过小,信噪比变差,基线平直度和测量数据的重复性会变差。此外,还需要考虑样品吸收峰宽度的影响。通常单波长测定时,一般选择在zui大吸收波长位置,线性范围容易满足,可选择较宽的狭缝(1~2nm)多波长测定时,很难同时在所有波长都满足线性范围要求,应选择较小的狭缝。 
  重复测定次数和波长扫描速度:对吸光度不是很大的样品,或者狭缝不是很小,这是检测器检测的光信号的强度是比较大的,重复性较好,可选择较少的重复次数。相反,如果样品吸光度很大,狭缝很小,选择较大的重复次数可获得更好的结果。 
  测定波长间隔:在扫描光谱时需要选择,可根据样品吸收峰的宽度进行选择,峰宽较大时,可选择较大的波长间隔。反之亦反。通常每个正常的吸收峰应该用不少于30个数据点表示出来。
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