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超微量分光光度计的设计原理及应用优势介绍
点击次数:1473 发布时间:2015-01-09
   超微量分光光度计采用精度高且机器终身准确,具有密封的光路系统且无拆开部件,免去了昂贵的校正费用。使用了的样品压缩技术,避免样品的挥发及待测样品种类的受限。具有灵活的可移动特性,可以选择不同的数据输出方式,通过内置打印机、SD-RAM卡、USB、或蓝牙输出。便于携带,可用于户外操作。超微量分光光度计是一款新型全波长超微量分光光度计,可用来检测核酸、蛋白质、细胞溶液、微阵列样品以及常规全波长扫描等。
  超微量分光光度计常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。核酸的定量是超微量分光光度计使用频率zui高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA。核酸的zui高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸,事先要选择对应的系数。如:1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算,从而得出相应的样品浓度。测试前,选择正确的程序,输入原液和稀释液的体积,尔后测试空白液和样品液。然而,实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者zui头痛的问题。灵敏度越高的仪器,表现出的吸光值漂移越大。
  事实上,超微量分光光度计的设计原理和工作原理,允许吸光值在一定范围内变化,即仪器有一定的准确度和度。如德国伯赫Colibri超微量分光光度计的准确度≤1.0%(1A)。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动,都是正常的。另外,还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值,离子浓度等:在测试时,离子浓度太高,也会导致读数漂移,因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液,如TE,可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素:由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒,尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了zui大程度减少颗粒对测试结果的影响,要求核酸吸光值至少大于0.1A,吸光值zui好在0.1-1.。在此范围内,颗粒的干扰相对较小,结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低,或者过高(超过光度计的测试范围)。zui后是操作因素,如混合要充分,否则吸光值太低,甚至出现负值;混合液不能存在气泡,空白液无悬浮物,否则读数漂移剧烈;必须使用相同的比色杯测试空白液和样品,否则浓度差异太大;换算系数和样品浓度单位选择一致;不能采用窗口磨损的比色杯;样品的体积必须达到比色杯要求的zui小体积等多个操作事项。
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